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耗材专区 | 应用EZsep™ HMR-Lipid固相萃取柱检测鱼肉中水杨酸残留量

更新时间:2024-10-18       点击次数:490

前言


水杨酸,分子式为C7H6O3,是植物柳树皮提取物,是一种天然的消炎药。水杨酸可以杀菌、消炎,从而常被用于对水产动物体表的水霉、鳃霉的剥离分解及伤口修复,水产动物因红斑、皮肤病、打印、赤皮、烂尾、溃烂、腐皮、肤霉、脱粘、白头白嘴、烂鳃、水肿、出血等引起的多种伤口能快速愈合。本品定期使用能有效预防和降低水产品发病率并快速净化水体,从而抑制降解水体中的各种杂菌及病原体,但长期过量使用会造成药物在动物体内富集,人类食用这些水产品会使残留的兽药进入人体,从而影响人体健康。

本文参照《鱼可食性组织中水杨酸残留量的测定 液相色谱-串联质谱法(征求意见稿)》,利用EZsep™HRM-Lipid固相萃取柱(300mg/6mL,货号:PZ12624) 净化样品,再通过高效液相色谱串联质谱检测进行检测,建立了鱼肉中水杨酸残留量的分析方法。



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实验过程



1.1 仪器与试剂
MPREP-SPE08手动固相萃取装置,货号:PZ0008,北京莱伯帕兹检测科技有限公司;
E.T.氮吹浓缩仪,货号:C020017,北京莱伯帕兹检测科技有限公司;
4500质谱系统,SCIEX公司;
EZsep™HRM-Lipid固相萃取柱(300 mg/6mL,货号:PZ12624),北京莱伯帕兹检测科技有限公司;
冷冻离心机,GL-20G-Ⅱ,上海安亭科学仪器厂;
乙腈(色谱纯),购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司;
甲酸(分析纯),购自国药集团化学试剂有限公司。

1.2 工作液配制
水杨酸标准物质:100mg/瓶,购自坛墨质检标准物质中心。
水杨酸标准储备液:取水杨酸标准品适量(相当于有效成分约10mg),精密称定,用乙腈稀释至10mL容量瓶中,配制成浓度为1000μg/mL的水杨酸标准储备液。
水杨酸D4标准储备液:浓度为100μg/mL溶剂为甲醇,购自上海安谱实验科技股份有限公司。
水杨酸标准中间液:移取水杨酸标准储备液0.1mL,用乙腈稀释至10mL容量瓶中,配制成浓度为10μg/mL的水杨酸标准中间液。
水杨酸标准使用液:水杨酸标准中间液1.0mL,用乙腈稀释至10mL容量瓶中,配制成浓度为1.0μg/mL的水杨酸标准使用液。
水杨酸D4标准使用液:移取水杨酸标准储备液0.1mL,用乙腈稀释至10mL容量瓶中,配制成浓度为1.0μg/mL的水杨酸D4标准使用液。
依次移取1.0μg/mL的水杨酸标准使用液0、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50、1.0mL,分别置于10mL容量瓶中并均加入水杨酸D4标准使用液0.2mL,以0.1%甲酸水溶液定容至刻度,得到浓度依次为0μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L的标准系列工作液,水杨酸D4浓度固定为20μg/L。

1.3 实验部分
1.3.1 样品制备
取鱼肉试样2g,置于50mL聚丙烯离心管中,添加水杨酸D4标准工作液40μL,加5%甲酸乙腈溶液10.0mL,涡旋混匀1min超声提取10min,10000r/min冷冻离心5min,收集上清液5.0mL待净化
1.3.2 固相萃取净化
EZsep™HRM-Lipid固相萃取柱(300 mg/6mL,货号:PZ12624)用5mL乙腈进行活化,取1.3.1待净化液上样,收集流出液,以E.T.氮吹浓缩仪,40℃氮气浓缩至近干,加1.0mL0.1%甲酸水溶液,涡旋混匀过微孔滤膜后供LC-MS/MS测定。
1.3.1 LC-MS/MS仪器条件
色谱柱:Shim-pack Velox C18(2.7μm,2.1*100mm);
检测方式:多反应监测(MRM);
流动相:A:0.1%甲酸水溶液;B:乙腈;
流速:0.3mL/min。

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表1 流动相梯度洗脱表


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实验结果



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表2 加标回收率

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图1 标液色谱图

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图2 空白样品色谱图

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图3 10μg/kg样品添加色谱图

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实验结论



本实验使用EZsep™HRM-Lipid固相萃取柱(300mg/6mL,货号:PZ12624) 对鱼肉样品进行净化,通过高效液相色谱串联质谱测定其中的水杨酸残留量,该方法的加标回收率在95.0%~105.3%之间,RSD为3.8%,满足标准要求。测试结果说明EZsep™HRM-Lipid固相萃取柱(300 mg/6mL,货号:PZ12624)能很好的完成方法中的净化工作,并且结果稳定、可靠

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参考文献



[1] 《鱼可食性组织中水杨酸残留量的测定 液相色谱-串联质谱法(征求意见稿)》